معرفی آزمایش
براي رنگآميزي باكتريهاي اسيد فست مانند مايكوباكتريومها و نيز باكتريهاي اسيد فست نسبي يا اسيد فست ضعيف مانند نوكاردياها بکار مي رود.
کاربرد بالینی
در مواردی که تشخیص نوکاردیوز مطرح باشد نمونه های خلط، چرک و اکسودا با این روش رنگ آمیزی می گردد.
روش تهیه محلول های رنگ آميزي
الف- تهیه رنگ کربول فوشین
فوشین قلیائی: ۴ گرم
فنل حل شده: ۸ میلی لیتر
اتانول ۹۵%: ۲۰ میلی لیتر
با آب مقطر حجم را به ۱۰۰ میلی لیتر برسانید.
ب- محلول بی رنگ کننده
اسید سولفوریک غلیظ: نیم میلی لیتر
آب مقطر: ۵/۹۹ میلی لیتر
اسید را به آب افزوده و خوب بهم بزنید.
ج- رنگ زمینه آبی متیلن
پودر آبی متیلن: ۴ گرم
آب مقطر: ۴۰۰ میلی لیتر
بوسیله تکان دادن ظرف محتوی رنگ، آن را در آب بطور کامل حل کنید.
روش رنگ آميزي:
- رنگ كانيون كربول فوشين را روي لام بريزيد و ۵ دقيقه صبر نمائيد.
- شستشوي كامل با آب
- لام ها را در محلول اسید سولفوریک یک درصد قرار داده تا کاملا رنگ گسترش ها زایل شود.
- شستشوي كامل با آب
- رنگ متيلن بلو به مدت ۳ دقيقه روي لام بماند.
- شستشوي كامل با آب
- لام را خشك كرده و با عدسي روغني ميكروسكوپ مشاهده كنيد.
ملاحظات
استفاده از رنگ كربول فوشين carbolfuchsin) ) در اين رنگ آميزي به دليل اينكه داراي غلظت بيشتري از فنل و فوشين بازيك است نيازي به حرارت دادن (مانند زيل نلسون كلاسيك) ندارد.
اسيدكلريدريك ۳% كه در محلول اسيدالكل وجود دارد براي مايكوباكتريومها مناسب است. اگر هدف بررسي و مشاهده نوكاردياها باشد بهتر است در تركيب اسيد الكل به عوض اسيدكلريدريك از اسيد سولفوريك ۱% استفاده شود.
منابع مورد استفاده:
قارچ شناسی پزشکی جامع . تالیف دکتر فریده زینی، دکتر امیر سید علی مهبد، دکتر مسعود امامی. انتشارات دانشگاه تهران. ۱۳۸۳